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3%NaCl ONPG生化管的原理及实验现象

王娟
录入时间:2019-12-26 9:23:31 来源:青岛海博生物

一、用途:

    用于检验弧菌的β-半乳糖苷酶的产生能力,亦可用之鉴别迟缓发酵糖细菌与乳糖阴性细菌。

 

二、实验原理:

    细菌分解乳糖依靠两种酶的作用,一种是β-半乳糖苷酶渗透酶,它位于细胞膜上,可送乳糖分子渗入细胞,另一种β-半乳糖苷酶,亦称乳糖酶,位于细胞内,能使乳糖水解成半乳糖和葡萄糖。

    具有上述两种酶的细菌,能在24-48h发酵乳糖,而缺乏此两种酶的细菌,不能分解乳糖。乳糖迟缓发酵菌只有β-半乳糖苷酶而缺乏β-半乳糖苷渗透酶,因而乳糖进入细胞很慢,需经培养基中1%乳糖较长时间的诱导,产生相当数量的渗透酶后,才能较快分解乳糖,故呈迟缓发酵现象。

    ONPG可迅速进入细菌细胞,被β-半乳糖苷酶水解,释放出黄色的临位硝基苯酚,故由培养液变黄可迅速测知β-半乳糖苷酶的存在,从而确定该菌为乳糖迟缓发酵菌。

  

三、试验方法:

   1.用磨砂轮在安瓿瓶颈部划线一圈,掰开待用;

   2.将待检培养物接种3%氯化钠三糖铁琼脂,36±1℃培养18h;

   3.挑取1满环新鲜培养物接种于生化管中,在通风橱中滴加1滴甲苯,摇匀后置37℃水浴5min后,置于36±1℃培养24h,观察实验结果。

 

四、结果观察与解释

   接种以下质控菌株,在36±1℃培养18-24小时:

质控菌株

菌株编号

生长情况

其他特征

副溶血性弧菌

ATCC17802

-

阴性,颜色不变

霍乱弧菌

/

-

阳性,变黄

溶藻弧菌

ATCC17749

-

阴性,颜色不变

大肠埃希氏菌

ATCC25922

-

阳性,变黄

创伤弧菌

ATCC27562

-

阳性,变黄

 

3%Nacl ONPG生化管质控结果

备注:a:副溶血性弧菌,b:霍乱弧菌,c:溶藻弧菌,d:大肠埃希氏菌,e:创伤弧菌,f:空白对照

 

五、注意事项

    本培养基仅为细菌鉴定的一部分,需做其他补充试验。

 

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